乳粉安全快檢方案：全自動流動注射分析儀精準測定硝酸鹽/亞硝酸鹽

硝酸鹽與亞硝酸鹽作為氮循環中的常見物質，廣泛存在于自然環境和食品體系內。一方面，過量攝入硝酸鹽和亞硝酸鹽不僅可能引發急性中毒，更可能致癌。另一方面，環境中硝酸鹽與亞硝酸鹽的含量也是衡量水體富營養化與農業面源污染的關鍵指標。因此，硝酸鹽與亞硝酸鹽的檢測分析對保障食品安全、維護公眾健康及評估環境質量具有至關重要的意義。國務院食安辦等六部門于2025年推出的《食品添加劑濫用問題綜合治理方案》明確要求嚴禁餐飲單位使用亞硝酸鹽等禁用物質，并嚴查超范圍、超限量使用添加劑的行為。此外，歐盟等國際市場也基于EFSA的評估大幅調低了相關限量（如腌制肉類亞硝酸鹽殘留由150mg/kg降至80mg/kg），這也對我國出口企業提出了新要求。由此可見，硝酸鹽與亞硝酸鹽的測試既是評估產品及環境安全、符合國家法規與標準要求的必要舉措，也是守護消費者健康、促進產業高質量發展的關鍵環節。

本文中使用?？芌KFI-100全自動流動注射分析儀，參考國家標準《GB 5009.33-2016 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》進行前處理，上機時試劑在封閉的管道中流動，可以一步完成試劑混勻、過鎘柱、讀取吸光度等步驟，具有快速、準確、操作簡單、自動化等優點。

1.儀器和耗材

1.1睿科產品支撐

RKFI-100全自動流動注射分析儀

1.2耗材及器材

鎘柱

蠕動泵管

移液槍

儀器管線

儀器自帶10mL玻璃管

儀器自帶50mL玻璃管

超聲波清洗器

1.3試劑

除非另有說明，所有試劑均為分析純。實驗用水為超純水機新鮮制備的超純水。除標準溶液外，流動注射試劑和實驗用水均超聲除氣后再使用。

飽和硼砂溶液（50g/L）：稱取25g硼酸鈉（Na2B407·10H2O），溶于500mL熱水中，冷卻后備用。

亞鐵氰化鉀（106g/L）：稱取26.5g亞鐵氰化鉀［K4Fe(CN)6·3H2O］，用水溶解，并稀釋至250mL。

乙酸鋅溶液（220g/L）：稱取55g乙酸鋅［Zn(CH3COO)2·2H2O］，加入7.5mL冰乙酸，用水溶解并稀釋至250mL。

氯化銨緩沖溶液（pH=8.5）：先配制溶液1，再配制緩沖溶液，具體如下。

溶液1：稱取42.5g氯化銨(NH4Cl）、0.5g乙二胺四乙酸二鈉（EDTANa2·2H2O）到燒杯中，加入300mL超純水進行溶解，完全溶解后將樣液移入500mL容量瓶中，洗滌液一并移入，水定容至刻度，配制好后將溶液倒入1000mL試劑瓶中。

緩沖溶液：稱取2g氫氧化鈉（NaOH）到燒杯中，加入30mL水進行溶解，完全溶解后將樣液移入50mL容量瓶中，洗滌液一并移入，水定容至刻度，將這50mL氫氧化鈉溶液全部倒入溶液1所在的試劑瓶中與之混合，混勻后使用。此溶液放冰箱可保存3個月。

顯色劑：往燒杯中加入200mL超純水，量筒量取50mL磷酸（ρ=1.69 g/mL，優級純），緩慢倒入燒杯中，混勻，稱取20g磺胺（C6H8N2O2S）、0.5g鹽酸萘乙二胺（C12H14N2·2HCl），倒入燒杯中進行溶解，完全溶解后將樣液移入500mL容量瓶中，洗滌液一并移入，水定容至刻度。此溶液室溫下保存1個月。

亞硝酸鹽標準溶液：濃度：100mg/L（以氮計）

硝酸鹽標準溶液：濃度：500mg/L（以氮計）

2.分析步驟

2.1流路圖

下圖1為儀器流路圖。將儀器需要的試劑配好后，超聲30min脫氣，然后按照流路圖將儀器上管線放到對應試劑中（管線上有貼標簽，按標簽也可）。儀器方法如下圖2。

圖1 分光光度法測定硝酸鹽/亞硝酸鹽流路圖

2.2前處理

選擇10個500mL錐形瓶，編號1-10，1號錐形瓶加入10mL超純水，2-10號錐形瓶則準確稱取10g（精確到0.01g）乳粉樣品移入瓶中。2-4號作為乳粉樣品，5-7號則作為亞硝酸鹽加標樣，8-10號作為硝酸鹽加標樣，移液槍準確移取1.5mL亞硝酸鹽標準溶液（10mg/L）到5-7號錐形瓶中進行加標，加標濃度為1.5mg/kg，移液槍準確移取5mL硝酸鹽標準溶液（10mg/L）到8-10號錐形瓶中進行加標，加標濃度5mg/kg。

往錐形瓶中加入12.5mL 50g/L飽和硼砂溶液，加入70℃左右水150mL，混勻，沸水浴15min后，取出冷水浴冷卻至室溫，加入5mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入5mL乙酸鋅溶液，將全部樣液轉移至200mL容量瓶中，清洗液一并移入容量瓶，加水定容至刻度，搖勻，靜置30min，濾紙（定量濾紙）過濾，棄去前面30mL初濾液，濾液上機測試。

2.3標準曲線及檢出限測定

a) 標準曲線測試

將亞硝酸鹽標準溶液用水稀釋成1.00mg/L的母液，將硝酸鹽標準溶液用水稀釋成5.0mg/L的母液，將兩個母液分別倒入儀器自帶的50mL玻璃管中，玻璃管放入儀器樣品盤中。

選擇亞硝酸鹽的儀器方法，建立序列，讓儀器自動稀釋一條標曲（稀釋倍數為1代表原液不稀釋），亞硝酸鹽母液為1.00mg/L，稀釋6個點，標曲點稀釋倍數分別為20、10、5、4、2、1，濃度為：0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L、1.0mg/L；再加超純水為0mg/L，一共7個點。

選擇硝酸鹽的儀器方法，建立序列，讓儀器自動稀釋一條標曲（稀釋倍數為1代表原液不稀釋），亞硝酸鹽母液為5.0mg/L，稀釋6個點，標曲點稀釋倍數分別為20、10、5、4、2、1，濃度為：0.25mg/L、0.50mg/L、1.0mg/L、1.25mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L。

將儀器調到正常狀態后，選擇儀器方法，分兩次運行序列，儀器自動稀釋標曲，標準曲線測試結果如下表1、圖3。

表1  硝酸鹽、亞硝酸鹽校準曲線上機測試結果

圖3 硝酸鹽標準曲線

圖4 亞硝酸鹽標準曲線

表3 亞硝酸鹽檢出限測試結果

3.準確度及精密度實驗

選取實際乳粉樣品進行加標，亞硝酸鹽加標濃度為1.5mg/kg（3倍國標檢出限），硝酸鹽加標濃度為5mg/kg（國標檢出限），加標后進行前處理，濾液上機測試。

本批次空白樣1個，乳粉樣品3個，加標樣3個，最終加標回收率以平均值計算，測試結果計算含量的時候要扣除空白值，具體數據如下表4所示，。

乳粉樣品中硝酸鹽加標回收率測試結果在95.8%~98.8%之間；亞硝酸鹽加標回收率測試結果在100.8%~103.1%之間。

 表4  乳粉中硝酸鹽、亞硝酸鹽加標樣測試（n=3）

4.注意事項

4.1 流動注射分析儀管路較細，容易堵塞，樣液上機測試前建議先用水相濾膜過濾一下。

4.2 試劑和環境溫度影響分析結果，試劑若放到冰箱貯存，要放至室溫再使用，分析過程中室溫最好保持20℃以上，且溫度波動小于±2℃。

4.3 為減小基線噪音，試劑應保持澄清，必要時應過濾。封閉的化學反應系統若有氣泡會干擾測定，因此，除標準溶液外的所有溶液須除氣，可采用超聲除氣30min或抽濾除氣。

4.4 當發現鎘柱顏色變銀灰色或有白色沉淀時，須進行鎘柱還原能力檢驗，一般一個月要檢查一次。若還原效率低于90%，需更換鎘柱。