解決方案丨牛奶中五氯酚殘留量的測定
五氯酚（PCP）通常以其鈉鹽（NaPCP）的形式存在，即五氯酚鈉，可用作落葉樹休眠期噴射劑，以防治褐腐病，也用作除草或殺蟲劑、觸殺型滅生性除草劑。其進入人體的方式主要通過長期、低劑量的飲食接觸，可能會對人體的肝、腎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成損害。2019年12月27日，五氯酚鈉被列入食品中禁止使用的藥物及其他化合物清單，標準要求不得檢出，所以，對于食品中五氯酚鈉的監(jiān)測是必要的。
五氯酚鈉常用的檢測標準為GB 23200.92-2016《動物源性食品中五氯酚殘留量的測定 液相色譜-質譜法》。本文參考上述標準，樣品中的五氯酚殘留用堿性乙腈水溶液提取，使用MAX固相萃取柱經(jīng)睿科SPEVA全自動樣品凈化濃縮儀一鍵進行凈化和濃縮，復溶后用液相色譜-串聯(lián)質譜儀檢測。在1.0 ug/kg的加標水平下，回收率在81.6%-84.3%之間，RSD值小于5%。本方案回收率高，精密度好，能夠很好地運用于牛奶中五氯酚殘留量的測定。
儀器和耗材
1.儀器
睿科SPEVA全自動樣品凈化濃縮儀
Agilent 1290Ⅱ/6470高效液相色譜-串聯(lián)質譜儀
SPEVA全自動樣品凈化濃縮儀
2.耗材
MAX強陰離子交換固相萃取柱（60mg/3mL）
3.試劑
甲醇（色譜純）
甲酸（色譜純）
乙腈（色譜純）
濃氨水（分析純）
乙腈-水溶液（7+3）：準確量取70mL乙腈和 30mL水，混合搖勻。
5％氨水-乙腈-水溶液：準確量取 5 mL 濃氨水，轉移入100mL容量瓶，用乙腈-水溶液（7+3）定容至刻度，混合均勻。
5％氨水甲醇溶液：量取5mL濃氨水，轉移入 100 mL容量瓶，用甲醇定容至刻度，混合均勻。
8％甲酸甲醇溶液：量取8mL甲酸，轉移入100mL容量瓶，用甲醇定容至刻度，混合均勻。
2％甲酸甲醇水溶液：取25mL 8％甲酸甲醇溶液，轉移入100mL容量瓶，用水定容至刻度，混合均勻。
樣品制備
稱取牛奶試樣2g（精確到0.01 g），置于50 mL離心管中，加入10mL 5%氨水-乙腈-水溶液，旋渦混合1 min，超聲提取5min，于4℃、10000 r/min條件下離心5min，收集上清液于上樣管中，待凈化。
1.凈化
依次用7mL甲醇和7mL水活化固相萃取柱，將提取溶液轉入經(jīng)過預處理的MAX柱中，以1.0 ml/min的流速使樣品溶液全部通過固相萃取柱，棄去流出液。依次用4mL 5%氨化甲醇、4mL甲醇、2mL 2％甲酸-甲醇-水溶液淋洗柱子，棄去流出液。淋洗液完全通過小柱后，用氮氣吹干固相萃取柱5min。用9 mL 8％甲酸甲醇溶液洗脫，洗脫液用試管收集，于40℃水浴條件下氮吹濃縮至1mL，用水定容至2mL，混勻。溶液以0.22μm有機濾膜過濾，供測定。固相萃取和濃縮方法如下所示。
2.固相萃取凈化條件
液質檢測條件
1.液相條件
2.液相梯度洗脫條件
3.質譜儀器參數(shù)
4.MRM參數(shù)
結果與討論
為了驗證該方法的回收率，本實驗取2g牛奶樣品，加入五氯酚標準品進行加標回收驗證(n=6)，添加水平為1ug/kg。同時制備5份經(jīng)提取、凈化和濃縮的空白試樣，加入適量標準品，配制成濃度為0.5μg/L、1.0μg/L、1.5μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L的基質校正曲線進行定量。實驗數(shù)據(jù)如表-2所示。加標回收率在81.6%-84.3%之間，RSD值控制在5%以內。說明該方案能夠很好地運用于牛奶中五氯酚殘留量的測定。
表-2.樣品加標回收率及RSD值（n=6）
總結
本解決方案操作方便，集樣品凈化和濃縮一體，回收率高，穩(wěn)定性好，符合GB 23200.92-2016《動物源性食品中五氯酚殘留量的測定 液相色譜-質譜法》的質控要求。
睿科SPEVA全自動樣品凈化濃縮儀將高通量固相萃取與高通量氮吹進行一體結合，可同時進行8通道樣品凈化，支持樣品架/收集架/柱架/柱插桿自動識別，氮吹濃縮自帶通道紅外定容，兼容常規(guī)SPE柱模式、大體積上樣模式、槍頭上樣模式和膜萃取模式，一機多用，真正為批量前處理提供幫助。
